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電泳遷移率檢測是轉(zhuǎn)錄因子研究的經(jīng)典方法

更新時間:2021-06-27   點擊次數(shù):2605次
  帶電粒子在單位時間內(nèi)移動的距離稱為電泳遷移率。凝膠遷移或電泳遷移率檢測(ElectrophoreticMobilityShiftAssay,EMSA)是一種檢測蛋白質(zhì)和DNA序列相互結(jié)合的技術(shù),可用于定性和定量分析;目前已用于研究RNA結(jié)合蛋白和特定的RNA序列的相互作用,是轉(zhuǎn)錄因子研究的經(jīng)典方法。
  凝膠遷移實驗又稱凝膠阻滯實驗或電泳遷移率實驗(EMSA,electrophoreticmobilityshiftassay),是目前研究核酸與蛋白質(zhì)相互作用的一種重要實驗手段,常用于轉(zhuǎn)錄因子與啟動子相互作用的驗證性實驗。該實驗利用核酸與蛋白結(jié)合后,在非變性聚丙烯酰氨凝膠中電泳的遷移速率會明顯降低的原理,通過設(shè)計特異性和非特異性的探針,通過孵育與目標(biāo)蛋白結(jié)合,形成探針-蛋白復(fù)合體,由于分子量變大,在聚丙烯酰氨凝膠中的電泳遷移速率下降,相比于未結(jié)合的探針會出現(xiàn)滯后效應(yīng),再通過探針上特殊的標(biāo)記物性質(zhì),通過轉(zhuǎn)膜、顯色或曝光,探針-蛋白復(fù)合體所在的位置便能形成條帶,從而證明核酸與蛋白的相互作用。目前隨著實驗技術(shù)的改進,能夠定性和定量的完成實驗。

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